(一)先将过量的特异抗体（或抗原）包被于载体（酶标板）上，通过抗原抗体反应使待侧物质（抗原或抗体）和酶标记物（用HRP-辣根过氧化物酶标记的抗体或抗原）也结合在载体上（固相分离），经洗涤去除游离的酶标记物后，加入底物，已经结合在载体上的标记酶促使底物显色。*终利用光电比色法，对待测物进行定性判断或定量测定。以上方法的检验灵敏度可以达到ng/ml水平。

（二）包被酶标板：将特异抗原溶液加入酶标板孔内，4℃过夜。然后用洗涤液洗涤3次到5次（洗板机洗板），这样溶液中的特异抗原被牢固吸附在酶标板的微孔表面，形成固相抗原，残液及杂质被清洗掉。

（三）加入被测样本液（病人血清）：样本液中若含有待测抗体，经过温育反应，则与已包被的抗原产生特异结合，生成包被抗原与待测抗体的复合物，被吸附在酶标板的微孔表面。然后再次进行洗涤，去除残液及干扰物质。

（四）加酶结合物：经过温育反应，生成包被抗原加待测抗体加酶标抗原的三者复合物，同样被吸附在微孔表面，然后再次洗涤，去除游离的或非特异沾附的酶结合物（洗板）。

（五）加显色液：经过10分钟到20分钟的显色反应，被吸附的复合物中的酶与显色底物液生成有色溶液。此时，由于游离或非特异吸附的酶已被**，所以溶液颜色的深浅，仅决定于已与待测物结合的酶的量，因此能真实反映待测物的浓度。被固化的酶越多，显色就会越深，这就说明待测物的浓度越大。

（六）加终止液：终止显色反应。

使用酶标仪检验：把完成显色的酶标板放在酶标仪仪器上进行光电比色检验，仪器分别检测空白孔、阴阳性对照孔、标准孔、质控孔和患者样本孔的吸光度值，并自动按程序要求计算出患者样本中待测物的浓度或进行定性分析。